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高速冷凍離心機在基因提取中的應用
更新時間：2016-11-09 點擊次數：1451次
高速冷凍離心機在基因提取中的應用
乙醇被*為是一種可以替代汽油的液體燃料，也是很好的燃油品質改善劑，甘蔗可以生成乙醇燃料。為提高甘蔗發酵效率，可提取釀酒酵母a288c基因組，克隆INO1基因，在工業釀酒酵母中過表達，提高菌種耐乙醇能力，提高細胞活力。下面簡單介紹下提取和擴增過程。
釀酒酵母基因組提取
原始釀酒酵母菌株s288c活化后，使用YPD固體培養基進行平皿劃線分離得到釀酒酵母菌株s288c單菌落，牙簽挑取單菌落接至50ml YPD液體培養基進行30 ℃搖瓶培養24-30 h，用高速冷凍離心機去上清（采用高速冷凍離心機保護樣本生物活性）；按照釀酒酵母基因組DNA提取試劑盒提取基因組DNA。
INO1基因序列擴增
以釀酒酵母S288C基因組DNA為模板進行PCR擴增。反應條件如下：預變性94℃ 5 min，變性94℃30s，退火54℃ 30s,延伸72℃ 97s，30個循環，延長72℃。10min保存4℃。反應結束后取2 uL PCR擴增產物于1％瓊脂糖凝膠電泳進行檢測。采用膠回收試劑盒進行膠回收。
回收后的PC產物進行連接、轉化和菌液PCR檢測，z后進行質粒提取和測序。
